# အမြင် ၀၄: HPLC အများအားဖြင့် သိရှိရန် – NMNH အဖြစ် ရောင်းချသည့် NMN ကို မည်သို့ သိရှိနိုင်မည်နည်း

**ရက်စွဲ:** ၂၀၂၆ ခုနှစ်၊ ဧပြီလ ၂၀ ရက်

**စီးရီး:** ရိန်ဝုဒ် ဘိုတက်နောလောဂီ NMNH စက်မှုလုပ်ငန်း သိရှိမှုများ

**အကြောင်းအရာ:** ပြောင်းလဲသော နီကိုတီနာမိုင်ဒ် မိုနိုနျူကလိုတိုက် (NMNH) တွင် အထောက်အထားအခြေပါ သိရှိမှုနှင့် လုပ်ကောင်းမောင်းကောင်း လုပ်ဆောင်မှုများကို ဖမ်းမိခြင်း

 

## ၁။ အကျဉ်းချုပ် အသေးစိတ် ရှင်းလင်းချက်

 

အသက်တန်းရှည်စေရေး သိပ္ပံနည်းကျ လုပ်ငန်းကြီး၏ မြန်ဆန်သော ဖွံ့ဖေါ်ရေးက သိပ်သည်းမှု ကျွမ်းကျင်မှု ကျွမ်းကျင်မှု (metabolic health) တွင် အရေးပါသော နေရာသို့ Reduced Nicotinamide Mononucleotide (NMNH) ကို ယူဆောင်လာခဲ့သည်။ သုတေသနများအရ NMNH သည် အောက်စီဒိုင်ဇ်ဖြစ်သော အဖော်ပေးသည့် ပစ္စည်း NMN ထက် NAD+ အတွက် ပိုမိုထိရောက်သော အဖော်ပေးသည့် ပစ္စည်းဖြစ်သည်။ အထူးသဖြင့် Salvage Pathway တွင် အမြန်နှုန်းကို ကန့်သတ်ထားသော အင်ဇိုင်းများကို ကျော်လွှားနိုင်ခြင်းကြောင့် ဖြစ်သည်။ သို့သော် ဤအားသော်လည်း ထိရောက်မှုမြင့်မားမှုသည် ထုတ်လုပ်မှု ရှုပ်ထွေးမှုကို သိသိသာသာ မြင့်မားစေသည်။ အထူးသဖြင့် အရည်အသွေးမြင့်မားသော NMNH ကို ဓာတုနည်းဖြင့် ထုတ်လုပ်ရာတွင် အောက်စီဂျင်ကင်းသော အခြေအနေများနှင့် အထူးသဖြင့် လျှော့ချရေး ကာတာလစ်များ လိုအပ်ပါသည်။ ထို့ကြောင့် ထုတ်လုပ်မှုစုစုပေါင်း စရိတ်သည် ပုံမှန် NMN ထက် ၃ ဆမှ ၅ ဆအထိ ပိုမိုမြင့်မားပါသည်။

 

ဤစီးပွားရေးအခြေအနေသည် အထူးသဖြင့် အခြေခံပစ္စည်းများ၏ ပေးပို့ရေး လုပ်ငန်းစဉ်တွင် စိုးရိမ်ဖွယ်ဖြစ်သော လုပ်ရပ်များကို အားပေးခဲ့သည်။ ထိုသို့သော လုပ်ရပ်များတွင် ပုံမှန် NMN ကို NMNH အဖြစ် သေးသေးဖွဲဖွဲ မှားယွင်းစွာ အမည်မှုန်းခြင်း သို့မဟုတ် "အပိုင်းအစ လျှော့ချထားသော" အမုံများကို ဖြန့်ဖြူးခြင်းဖြစ်ပြီး ထိုအမုံများတွင် မှီဝဲမှုမရှိသော NMN နှင့် အခြားသေးငယ်သော အညစ်အကှေးများ ပါဝင်နေသည်။ NMN နှင့် NMNH တို့သည် ဖွဲ့စည်းပုံအရ အလွန်တူညီသောကြောင့် မှုန်းမှုန်းသော စမ်းသပ်မှုများတွင် ပုံပေါ်ပေါ်လွဲလွဲ ပုန်းကွယ်နိုင်သည်။

 

ဤအမြင်သည် အရည်အသွေးထိန်းချုပ်ရေး (QC) ဌာနများ၊ တတိယပါတီစာမေးပေးသူများနှင့် ထုတ်ကုန်ဖော်မော်လာများအတွက် NMNH ကို သေချာစွာသိရှိနိုင်ရန်နှင့် NMN အစားထိုးမှုကို ရှာဖွေတွေ့ရှိနိုင်ရန် နည်းပညာအရ အပြည့်အစုံသော အခြေခံကျသော အဆောက်အအုပ်ကို ပေးစေသည်။ ဤသိရှိမှု၏ အခြေခံအားဖဲ့သည် လျှပ်စစ်စွမ်းအင်စုပ်ယူမှုတွင် အဓိကအားဖဲ့သော ပြောင်းလဲမှုပေါ်တွင် အခြေခံပါသည်။ အထူးသဖြင့် ၃၄၀ nm နှင့် ၂၆၀ nm အကြား ကွာခြားချက်နှင့် ပုံစံပေါ်လွှမ်းမိုးမှုရှိသော ကြေးနီပိုင်းအားဖဲ့ ကြေးနီပိုင်းအိုင်ဒီဟိုကြွေးပိုင်း စုပ်ယူမှုအားဖဲ့ အသေးစိတ်အပြုအမှုအားဖဲ့ အပြုအမှုများပေါ်တွင် အခြေခံပါသည်။

 

## ၂။ ဖော်ပြချက်အရ အဆောက်အအုပ်ပုံစံ – NMN နှင့် NMNH

 

စုပ်ယူမှုဆိုင်ရာ စိန့်စားမှုကို နားလည်ရန်အတွက် ပထမဆုံးအားဖဲ့ NMN ၏ ပြောင်းလဲမှုများကို နားလည်ရန် လိုအပ်ပါသည်။ NMN (C11H15N2O8P) သည် ပိုင်းရီဒီနီယမ် စုပ်ယူမှုစနစ်ကို ပိုင်ဆိုင်ပါသည်။ ဤစနစ်သည် အိုက်စီဒိုင်ဇ်ဖော်မ်တွင် အားကောင်းသော အိုင်ယွန်နိုင်သော အရှိန်အားကောင်းသော စနစ်ဖြစ်ပါသည်။ ထို့အတူ NMNH (C11H17N2O8P) သည် လျှပ်စစ်စွမ်းအင်လျှော့ချမှုဖော်မော်လာဖြစ်ပါသည်။ အထူးသဖြင့် ၁,၄-ဒိုင်ဟိုကြွေးပိုင်းနီကိုတီနာမိုင်းဒ် မိုနိုနျူကလိုတိုက်ဖ် ဖော်မော်လာဖြစ်ပါသည်။

 

ဤလျှပ်စစ်စွမ်းအင်လျှော့ချမှုဖော်မော်လာသည် နီကိုတီနာမိုင်းဒ် စုပ်ယူမှုစနစ်သို့ ဟိုက်ဒြိုဂျင်အက်တမ် ၂ ခုနှင့် လျှပ်စစ်စွမ်းအင်အိုင်ယွန် ၂ ခုကို ထည့်သွင်းပေးပါသည်။ ဤအရှိန်အားကောင်းသော ပြောင်းလဲမှုသည် မော်လီကျူး၏ ရုပ်ပိုင်းဆိုင်ရာ ဓာတုဗေဒအပေါ် အလွန်အများကြီး သက်ရောက်မှုရှိပါသည်။

၁။ အရွယ်မှုန်းမှု ပျောက်ဆုံးခြင်း - NMN တွင်ပါဝင်သည့် pyridinium စုပ်စမ်းမှုသည် အရွယ်မှုန်းဖွဲ့စည်းမှုရှိသည်။ NMNH သို့ လျှော့ချပေးလျှင် စုပ်စမ်းမှုသည် ၁၊၄- dihydropyridine စနစ်ဖြစ်လာပြီး အရွယ်မှုန်းမှုန်းမှု မရှိတော့ပါ။ ဤပြောင်းလဲမှုသည် UV စုပ်စမ်းမှု ပြောင်းလဲမှုကို အဓိကအားဖဲ့သည့် အကြောင်းရင်းဖြစ်သည်။

၂။ အားသာခြင်း ပျောက်ဆုံးခြင်း - NMN သည် ဇီဝကမ္မဖော်စပ်မှု pH တွင် zwitterion အဖြစ်ရှိပြီး စုပ်စမ်းမှု၏ နိုက်ထရိုဂျင် အက်တမ်ပေါ်တွင် အမြဲတမ်း အပေါ်သို့ အားသာခြင်းရှိသည်။ NMNH သည် စုပ်စမ်းမှု၏ နိုက်ထရိုဂျင် အက်တမ်ပေါ်တွင် လျှပ်စစ်အားသာခြင်း မရှိသည့် အားဖဲ့သည့် အရာဖြစ်ပြီး HPLC တွင် အခြေခံအားဖဲ့သည့် အစိတ်အပိုင်းများနှင့် အပြန်အလှန် အကျူးအလွန် ပြောင်းလဲမှုကို ဖော်ပေးသည်။

၃။ အိုက်စီဒေးရှင်း အလားအလာ - NMNH သည် အလွန်အားကောင်းသည့် လျှော့ချပေးသည့် အရာဖြစ်သည်။ NMN သည် လေထုရှိ အောက်စီဂျင်အောက်တွင် သိပ်မှုန်းသည့် အရာဖြစ်သည်။ NMNH သည် အန်တီအောက်စီဒင့်များဖြင့် မထိန်းသိမ်းပါက သို့မဟုတ် အားနည်းသည့် ပတ်ဝန်းကျင်တွင် မသိမ်းဆောင်ပါက NMN သို့ ပြန်လည် အိုက်စီဒေးရှင်းဖြစ်လာနိုင်သည်။

 

## ၃။ စပက်ထရိုဖိုတိုမက်ထရစ် အမှတ်လက်ခံမှု - ၃၄၀ nm နှင့် ၂၆၀ nm စည်းမျဉ်း

 

NMN နှင့် NMNH ကို ခွဲခြားရာတွင် အများဆုံး အများအားဖဲ့သည့် နည်းလမ်းမှာ UV-Vis စပက်ထရိုစကော့ပီဖြစ်သည်။ ဤနည်းလမ်းသည် nicotinamide အစိတ်အပိုင်းတွင် လျှပ်စစ်အားဖဲ့သည့် အရာများကို အခြေခံသည်။

 

### ၃.၁ ၂၆၀ နမ်မီတာ အစွန်း (NMN ၏ လက္ခဏာ)

NMN သည် NAD+ ကဲ့သို့ပင် ၂၆၀ နမ်မီတာ (nm) အနီးတွင် အားကောင်းသော စုပ်ယူမှုအများဆုံး (λmax) ကို ပြသပါသည်။ ဤသည်မှာ အရိုမက်တစ် ဟက်တ်ရိုစိုက်လ်များတွင် အများအားဖြင့် တွေ့ရသည့် ပိုင်းခြားမှု (π→π*) ဖြစ်ပါသည်။ HPLC တွင် အသုံးပြုသည့်အခါ အားလုံးသော အာရှန်န်များကို ၂၅၄ nm တွင်သာ စောင်းကြည့်ပါက NMN နှင့် NMNH နှစ်များစုံလုံးအတွက် အစွန်းများကို တွေ့ရမည်ဖြစ်ပါသည်။ အဘယ်ကြောင့်ဆိုသော် ဤနေရာတွင် နှစ်များစုံလုံးတွင် စုပ်ယူမှုအနည်းငယ်ရှိသောကြောင့်ဖြစ်ပါသည်။ သို့သော် ၂၆၀ nm အစွန်းသည် NMN အတွက် *အဓိက* အစွန်းဖြစ်ပါသည်။ "NMNH" ဟု အမည်ပေးထားသည့် နမူနာတစ်ခုတွင် ၂၆၀ nm အစွန်းသာ ရှိပါက ထိုနမူနာသည် လုံးဝ လိမ်လည်မှုဖြစ်ကြောင့် အတည်ပြုနိုင်ပါသည်။

 

### ၃.၂ ၃၄၀ nm အစွန်း (NMNH ၏ လက္ခဏာ)

အိုင်းရင်းကို ၁,၄-ဒိုင်ဟိုက်ဒရိုပိုင်ရိဒိန် ပုံစံသို့ လျှော့ချခြင်း (NMNH) သည် အီလက်ထရွန်စုပ်ယူမှုအသစ်တစ်များကို ဖော်ပေးပါသည်။ ထိုအသစ်သော အီလက်ထရွန်စုပ်ယူမှုများမှာ နိုက်ထရိုဂျင်ပေါ်ရှိ အီလက်ထရွန်တွေ့မှုများမှ ကွန်ဂျူဂိတ်စနစ်သို့ အီလက်ထရွန်များ ပေးပေးချင်း (n→π*) ဖြစ်ပါသည်။ ထိုအရာသည် ၃၄၀ nm (UVA အပိုင်း) တွင် အထင်ကြီးဖွယ် စုပ်ယူမှုအစွန်းကို ဖော်ပေးပါသည်။

- **အမှန်တကယ်ဖြစ်ကြောင့် အထောက်အထား** - အမှန်တကယ်ဖြစ်သည့် NMNH နမူနာသည် ၃၄၀ nm တွင် အထင်ကြီးဖွယ် အစွန်းကို ပြသရမည်ဖြစ်ပါသည်။

- **သန့်စင်မှုညွှန်ပ indicators:** အထွက်မြင့်မှုရှိသော NMNH တွင် 260nm တွင် စုစုပေါင်းစုပ်ယူမှု၏ ၄၀-၅၀% ခန့်သည် 340nm တွင် စုပ်ယူမှုဖြစ်သည်။ ဤအချိုး (A340/A260) သည် အရေးကြီးသော "မှုန်းသတ်မှတ်မှု လက်မှတ်" ဖြစ်သည်။

 

**ကျွမ်းကျင်သူ၏ အကြံပေးချက်:** Rainwood Biotech ၏ ကုန်ကြမ်းလက်ခံမှုအတွက် အတွင်းပိုင်းစံနှုန်းသည် 200nm မှ 450nm အထိ UV-Vis စကင်န်လုပ်ရန် လိုအပ်သည်။ 340nm တွင် "ဖလက်လိုင်း" ဖြစ်ပါက ပေးသောသူ၏ HPLC အစီရင်ခံစာတွင် ဘာပဲဖြစ်ဖြစ် အလိုအလျောက် ပယ်ချမှုဖြစ်သည်။

 

## ၄။ HPLC ပုံစံရှာဖွေရေး ဆန်းစစ်ခြင်း - ကရိုမက်တိုဂရပ်ဖီက်ကို ကျွမ်းကျင်စွာ အသုံးပြုခြင်း

 

UV-Vis သည် မှုန်းသတ်မှတ်မှုစစ်ဆေးမှုကို အမြန်ဆောင်ရွက်ပေးသော်လည်း သန့်စင်မှုကို တိကျစွာ တွက်ချက်ရန်နှင့် အနည်းငယ်သော အညစ်အကှေးများကို ရှာဖွေရန်အတွက် High-Performance Liquid Chromatography (HPLC) ကို အသုံးပြုရန် လိုအပ်ပါသည်။ သို့သော် NMN နှင့် NMNH အကြား ဖွဲ့စည်းပုံဆိုင်ရာ ဆင်တူမှုကြောင့် နည်းလမ်းဆိုင်ရာ ပါရာမီတာများကို တိကျစွာ ထိန်းညှိမှုမရှိပါက တူညီသော အချိန်တွင် ထွက်ပေါ်လာမှု (co-elution) ဖြစ်နိုင်ခြေသည် အလွန်မြင့်မားပါသည်။

 

### ၄.၁ အမှုန်းမှတ်ထားသော အပိုင်းအစ ရွေးချယ်ခြင်း

NMN အား စုစည်းမှု ခွဲခြမ်းစိတ်လေ့လာရာတွင် စံနှုန်း C18 ပုံစံပြောင်းလဲထားသော ဖောက်စ်ကောလံများကို အများအားဖြင့် အသုံးပြုကြသည်။ သို့သော် ဤအဏုမောလီကျူလ်နှစ်များသည် အလွန် ပိုလာ (polar) ဖြစ်သောကြောင့် ၎င်းတို့သည် အလွန်စေးသောအချိန်တွင် အထွက်ရှိပါသည်။ ထိုအချိန်သည် အများအားဖြင့် အရည်ဖောက်စ် (solvent front) နှင့် အတူတွေ့ရပါသည် ("void volume")။

- **HILIC (Hydrophilic Interaction Liquid Chromatography):** ပိုမိုကောင်းမွန်သော ခွဲခြမ်းစိတ်မှုအတွက် Rainwood Biotech မှ HILIC ကောလံများ (ဥပမါ Amide သို့မဟုတ် Diol ဖောက်စ်များ) ကို အကြံပေးပါသည်။ HILIC သည် ဤပိုလာသော nucleotides များအတွက် ပိုမိုကောင်းမွန်သော အက်ဆော့ရှင် (retention) ကို ပေးစေပါသည်။ ထို့ကြောင့် NMN၊ NMNH နှင့် Nicotinamide ကဲ့သို့သော ပျက်စီးမှုထုတ်ကုန်များကို ရှင်းလင်းစွာ ခွဲခြမ်းစိတ်နိုင်ပါသည်။

- **C18 အသုံးပြုမှုအတွက် အကောင်းဆုံး ပုံစံပေးခြင်း:** C18 ကောလံကို အသုံးပြုပါက "Polar Embedded" သို့မဟုတ် "AQ" အမျိုးအစားဖြစ်ရပါမည် (ဥပမါ Waters T3 သို့မဟုတ် Phenomenex Luna Omega PS C18)။ ထိုသို့မှုန်းမှုများသည် ရေအားလုံးပါဝင်သော mobile phases တွင် phase collapse ဖြစ်ခြင်းကို ကာကွယ်ပေးပါသည်။

 

### ၄.၂ အချိန်တွင် အထွက်ရှိမှု (RT) ရှေ့နောက် ပြောင်းလဲမှု

NMNH တွင် အပေါ်ယံအားဖော်သော အားသာခြင်း (positive charge) ပျောက်ဆုံးခြင်းကြောင့် ၎င်းသည် NMN ထက် အနည်းငယ် ပိုမို lipophilic ဖြစ်လာပါသည်။ ထို့ကြောင့် reversed-phase system တွင်-

- **NMN (ပိုမိုပိုလာ)** သည် ပထမဆုံး အထွက်ရှိပါသည်။

- **NMNH (ပိုမိုမသောက်သုံးနိုင်သော)** သည် ဒုတိယအကြိမ် အထွက်ရှိပါသည်။

ပုံမှန်အားဖြင့် 20mM Ammonium Acetate (pH 7.0) ၏ ရွေ့လျားမှုအဆင့်နှင့် Acetonitrile ၏နှေးကွေးသော gradient နှင့်အတူ NMN သည် 2.8 မိနစ်တွင်ပြန့်ထွက်နိုင်ပြီး NMNH သည် 3.5 မိနစ်တွင်ပြန့်ထွက်နိုင်သည်။ "Shift" ဟာ မိနစ် 0.3 ထက်နည်းပြီးဆိုရင်တော့ ဒီနည်းလမ်းဟာ နှစ်ခုကြား ခွဲခြားဖို့ လုံလောက်တဲ့ ဆုံးဖြတ်ချက်စွမ်းအား မရှိဘူးလို့ ဆိုနိုင်ပါတယ်။

 

၄.၃ pH အာရုံခံမှုထောင်ချောက်

NMNH ဆန်းစစ်မှုမှာ ဒါက အများဆုံး အမှားပါ။ "စံနှုန်း NMN" နည်းများစွာသည် အက်ဆစ်အက်ဆစ်များ (ဥပမာ- pH 2.5 တွင် 0.1% ဖော့စဖောအက်ဆစ် သို့မဟုတ် ဖိုမစ်အက်ဆစ်) ကို အသုံးပြုသည်။

**NMNH ဟာ pH < 6.0 မှာ အလွန်မတည်ငြိမ်ပါတယ်။**

NMNH ကို အက်ဆစ် HPLC စနစ်ထဲ ထိုးသွင်းရင် ၎င်းဟာ အရှိန်မြင့်စွာ အောက်ဆီဒစ်ဖြစ်သွားမယ်၊ ဒါမှမဟုတ် အက်ဆစ်က ဓာတ်ပြုတဲ့ ပြန်လည်စီစဉ်မှုကနေ NMN နဲ့ အခြား ဘေးထွက်ပစ္စည်းတွေအဖြစ် ပြောင်းလဲသွားမှာပါ။ ရလဒ်မှာ NMN အမြင့်ဆုံးကြီးနဲ့ NMNH အမြင့်ဆုံးသေးငယ် (သို့) မရှိတာကို ပြသတဲ့ chromatogram တစ်ခုပါ။ စမ်းသပ်သူက အစိမ်းရောင်ပစ္စည်းဟာ မကောင်းဘူးလို့ မှားယွင်းစွာ ဆုံးဖြတ်နိုင်ပေမဲ့ လက်တွေ့မှာ စမ်းသပ်နည်းက နမူနာကို ဖျက်ဆီးခဲ့တယ်။

- **Rainwood Standard:** Mobile phase တွေကို pH 7.0 မှ 7.5 အထိ ထိန်းသိမ်းထားရပါမယ်။

 

## ၅။ NMNH ကုန်ကြမ်းများတွင် NMN ညစ်ညမ်းမှုကို ရှာဖွေခြင်း

 

NMN မှ NMNH သို့ လျော့ကျမှုသည် အပြည့်အဝမဖြစ်ပါက (လုပ်ဆောင်မှုကြွင်းကျန်) သို့မဟုတ် NMNH သည် သိုလှောင်စဉ်ကြောင့် အစိုင်းအမိုးအောက်သို့ တစ်စိတ်တစ်ပိုင်း အောက်ဆီဒိုင်ဇ်ဖြစ်ပါက ညစ်ညမ်းမှုဖြစ်ပါသည်။

 

### ၅.၁ နှစ်မျောင်းစုံ လျှောင်းအလင်းရောင်ဖြင့် အရေအတွက်သတ်မှတ်ခြင်း

NMNH ၏ သန့်စင်မှုကို တိကျစွာ အကဲဖြတ်ရန် HPLC စက်သည် အနည်းဆုံး နှစ်မျောင်းစုံသော လျှောင်းအလင်းရောင်ကို တစ်ပါတည်း စောင်းကြည့်ရန် သတ်မှတ်ထားရပါမည်။

၁။ **ခုန်နယ် A (၃၄၀ nm):** ဤခုန်နယ်သည် "လျော့ကျသော" အပိုင်းအလေးပေါ်တွင် အထူးသဖြင့် အသုံးပြုသည်။ NMNH နှင့် အခြားသော လျော့ကျသော အဆင့်များ (NADH ကဲ့သို့သော) သာလျှင် ဤနေရာတွင် ပေါ်လာမည်ဖြစ်သည်။

၂။ **ခုန်နယ် B (၂၆၀ nm):** ဤခုန်နယ်သည် NMN၊ NMNH နှင့် Nicotinamide စသည့် "စုစုပေါင်း Nicotinamides" များကို စောင်းကြည့်နိုင်သည်။

 

၂၆၀ nm တွင် NMN ၏ Peak Area ကို တွက်ခြင်းဖြင့် NMNH Peak Area နှင့် နှိုင်းယှဉ်ပြီး NMN ညစ်ညမ်းမှု၏ တိကျသော အဆင့်ကို ဆုံးဖြတ်နိုင်ပါသည်။ အရည်အသွေးမြင့်မားသော NMNH ကုန်ကြမ်း (Rainwood Grade) တွင် **NMN ပမာဏသည် ၀.၅% အောက်ဖြစ်ရပါမည်**။

 

### ၅.၂ "၉၉% သန့်စင်မှု" ဟု လှည့်စားခြင်း

ကုန်ပစ္စည်းပေးသွင်းသူများ အများအပြားသည် လှိုင်းအလျားတစ်ခုတည်း (ပုံမှန်အားဖြင့် 210nm သို့မဟုတ် 254nm) တွင် "Area Percent" ကို အခြေခံ၍သန့်စင်မှုအကြောင်း အစီရင်ခံထားသည်။ ဒါက အလွန်လွဲမှားစေပါတယ်။ ၂၁၀nm မှာ NMN နဲ့ NMNH တို့မှာ molar စုပ်ယူမှုနှုန်းဟာ နီးပါးတူညီပါတယ်။ NMN ၂၀% နှင့် NMNH ၈၀% ပါဝင်သော နမူနာတစ်ခုတွင် ဓာတ်ခွဲသူသည် အမြင့်နှစ်ခုစလုံးကို တစ်ခုအဖြစ် ပေါင်းစပ်ထားသည် သို့မဟုတ် NMN အမြင့်ကို ခွဲခြားနိုင်ခြင်းမရှိပါက "စုစုပေါင်းသန့်စင်မှု" ကို ၁၀၀% ပြသလိမ့်မည်။

** စစ်ဆေးမှု စည်းမျဉ်း:** အမြဲတမ်း ပေါင်းစည်းမှုဇယားကို တောင်းပါ။ NMN ထိန်းသိမ်းချိန်မှာ အမြင့်ဆုံးရှိရင် "လျော့နည်း" သန့်ရှင်းမှု တွက်ချက်မှုကနေ လျှော့ချရပါမယ်။

 

၆။ ဆွေးမြေ့မှုလမ်းကြောင်းများ - ဆန်းစစ်ရေး "မုန့်စုပ်"

 

NMNH ဟာ ပျောက်သွားရုံတင်မကပဲ ပစ္စည်းရဲ့ အသက်နဲ့ အရည်အသွေးကို သတ်မှတ်တဲ့ အမှတ်အသားအဖြစ် လုပ်ဆောင်တဲ့ သီးခြား မော်လီကျူးတွေအဖြစ် ပြိုကွဲသွားတယ်။

1. **အော်ဆီဒေးရှင်း (NMNH → NMN):** အများဆုံးဖြစ်သောလမ်းကြောင်း။ "သန့်ရှင်းသော" NMNH နမူနာတစ်ခုတွင် NMN မြင့်မားသောအဆင့်များသည် မတည်ငြိမ်မှု သို့မဟုတ် အောက်ဆီဂျင်သို့ ထိတွေ့မှုအားနည်းမှုကို ညွှန်ပြသည်။

၂။ **ရေအားဖြင့် ကွဲထွက်ခြင်း (NMNH → NRH)** – စိုစွတ်မှုရှိသည့်အခါ ဖှော့စ်ဖိတ်အုပ်စုသည် ကွဲထွက်နိုင်ပြီး Nicotinamide Riboside Reduced (NRH) ကို ထုတ်လုပ်ပေးပါသည်။ NRH သည် ၃၄၀ nm တွင်လည်း စုပ်ယူမှုရှိသော်လည်း ၎င်း၏ အချိန်ကြာမှုသည် သိသိသာသာကွဲပါသည်။

၃။ **စက်ဝိုင်းဖွင့်ခြင်း** – အလွန်အမင့်ဖြစ်သည့်အခါ ဒိုင်ဟိုက်ဒရိုပိုလီဒရိုင်းစက်ဝိုင်းသည် ဖွင့်လေးသွားပြီး ၃၄၀ nm တွင် စုပ်ယူမှုမရှိတော့သည့် လုပ်ဆောင်မှုမရှိသော ဇီဝကမ္မဖော်စပ်မှုများ ဖြစ်ပေါ်လာပါသည်။

 

ဤ "လမ်းညွှန်မှုများ" ကို စောင်းကြည့်ခြင်းဖြင့် Rainwood Biotech သည် ပေးသွင်းသူများသည် "သစ်သော" NMNH ကို ရောင်းချခြင်း သို့မဟုတ် "ပြန်လည်ရယူထားသည့်" ပစ္စည်းကို မကောင်းစွာ ကိုင်တွယ်မှုများဖြင့် ရောင်းချခြင်းကို သိရှိနိုင်ပါသည်။

 

## ၇။ ဝယ်ယူမှုအတွက် အရည်အသွေးထိန်းချုပ်မှုနှင့် စစ်ဆေးမှုစာရင်း

 

အသစ်သော NMNH ပေးသွင်းသူကို စစ်ဆေးခြင်း သို့မဟုတ် အသစ်သော NMNH အမှုန်အုပ်စုကို စစ်ဆေးခြင်းအခါ Rainwood Biotech သည် အောက်ပါ "ကြီးမားသော စစ်ဆေးမှု" အဆင့်များကို အက်ဒ်ဗိုက်စ်ပေးပါသည်။

 

* **အဆင့် ၁ – မျက်စိဖြင့် စစ်ဆေးခြင်း** – NMNH သည် သဘောတော်အတိုင်း ပိမ့်ပိမ့်နေသော အဖြူရောင်မှ အဝါရောင်အထိ အမှုန်အုပ်စုဖြစ်ပါသည်။ အကယ်၍ ၎င်းသည် "နှင်းဖြူ" ဖြစ်ပါက အလွန်အမင့် ဖြော့ပေးထားခြင်း သို့မဟုတ် အများအားဖြင့် NMN ဖြစ်နိုင်ပါသည်။

* **အဆင့် ၂။ ရှိမှုနှင့် pH တန်ဖိုး။** ဒီအိုင်အွန်ဖရီးသုပ်ထားသောရေ ၁၀ မီလီလီတာတွင် ၁၀၀ မီလီဂရမ်ကို ပျော်ဝင်စေပါ။ ရလာသောအဖျော်ယူမှုသည် အနည်းငယ်အဝါရောင်ဖြစ်သင့်သည်။ pH တန်ဖိုးကို တိုင်းကုပ်ပါ။ ၎င်းသည် အလွန်နီထရယ်ဖြစ်သင့်သည်။

* **အဆင့် ၃။ UV-Vis အမှုန်အမှုန်စစ်ဆေးခြင်း။** အဖျော်ယူမှုကို စကင်လုပ်ပါ။ ၃၄၀ nm အမျှင်ကို အတည်ပြုပါ။ A340/A260 အချိုးကို တွက်ချက်ပါ။

* **အဆင့် ၄။ HPLC နည်းလမ်းအကဲဖြတ်ခြင်း။** မောဘိုင်းဖေ့စ်၏ pH သည် ၇.၀ အထက်ဖြစ်ကြောင်း သေချာစေပါ။ COA တွင် "နည်းလမ်း ၀.၁% TFA" ဟု ဖော်ပြထားပါက ရလာဒ်များသည် မှန်ကန်မှုမရှိပါ။

* **အဆင့် ၅။ NMN ထည့်သွင်းစမ်းသပ်ခြင်း။** နမူနာကို ထည့်သွင်းပါ။ ထို့နောက် ၁% သိရှိထားသော NMN စံနမူနာဖြင့် "ထည့်သွင်းခြင်း" ပြုလုပ်ပြီးနောက် ဒုတိယအကြိမ် ထည့်သွင်းပါ။ NMN အမျှင်သည် တိုးပါလျှင် သို့မဟုတ် NMNH အမျှင်သည် သီးခြားဖြစ်နေပါက အမျှင်ခွဲခြင်းအတွက် နည်းလမ်းသည် အတည်ပြုထားပါသည်။

 

## ၈။ မက်ထရစ်အကျိုးသက်ရောက်မှုများနှင့် နမူနာပြင်ဆင်မှုဆိုင်ရာ စိန်ခေါ်မှုများ

 

ဖော်မျူလေတာများနှင့် ဘရန်ဒ်ပိုင်ရှင်များအတွက် စမ္ဗင့်အများအားဖြင့် သုံးစွဲသည့် ပစ္စည်းများကို စိစိမ့်စေသည့် အခက်အခဲသည် သုံးစွဲသည့် ပစ္စည်းများအထိသာမက ပုံစံပေးထားသည့် ဆေးပုံစ်များအထိ ပါဝင်ပါသည်။ ကော်ပ်ဆူးလ် (capsule) သို့မဟုတ် ဆော့ဖ်ဂဲလ် (softgel) တွင် NMNH ကို စမ်းသပ်ခြင်းသည် သန့်စင်ထားသည့် မှုန်မှုန် (powder) တွင် စမ်းသပ်ခြင်းထက် အဆများစွာ ရှုပ်ထွေးပါသည်။ အဓိကအားဖော်ပြရလျှင် "မက်ထရစ်အက်ဖက်တ်" (Matrix Effects) ကြောင့်ဖြစ်ပါသည်။ ထိုသို့သော မက်ထရစ်အက်ဖက်တ်များသည် အတွင်းပါသည့် အာက်တစ်မဟုတ်သည့် ပစ္စည်းများ (excipients) မှ ဖြစ်ပေါ်လာပါသည်။

 

### ၈.၁ အာက်တစ်မဟုတ်သည့် ပစ္စည်းများ၏ အန်တာဖေးယာ (Excipient Interference)

မိုက်ခရိုကရစ်တလင် ဆဲလျူလို့စ် (MCC)၊ မဂ္ဂနီဆီယမ် စ်တီယာရိတ် (Magnesium Stearate) နှင့် တိုင်တေနီယမ်အခြေပြု အရောင်များကဲ့သို့သော အသုံးများသည့် အာက်တစ်မဟုတ်သည့် ပစ္စည်းများများသည် UV အလင်းကို рассеять (scatter) ခြင်း သို့မဟုတ် ၂၁၀-၂၆၀ nm အတွင်း အာက်စ်အောက်စင် (absorb) လုပ်သည့် အောဂဲနစ်ပစ္စည်းများကို အနည်းငယ် စိမ့်ထွက်စေနိုင်ပါသည်။ နမူနာပြင်ဆင်မှုသည် အသေအချာလုပ်ထားခြင်းမရှိပါက ဤသို့သော "အသံညစ်" (noise) အမိုက်များသည် ကျွန်ုပ်တို့ ရှာဖွေနေသည့် NMN အနည်းငယ်သာရှိသည့် အဆင့်ကို ဖုံနေစေနိုင်ပါသည်။

ရိန်ဝုဒ် ဘိုင်အိုတက် (Rainwood Biotech) သည် နမူနာကို HPLC ကောလံတွင် ထည့်သွင်းရနှင့်အလျောက် NMNH ကို အမြဲတမ်း အာက်တစ်မဟုတ်သည့် ပစ္စည်းများမှ ခွဲထုတ်ရန် အဆင့်များစွာပါသည့် အရည်ဖျော်ပေးသည့် လုပ်ငန်းစဉ် (MSEP) ကို အသုံးပြုပါသည်။ ထိုသို့လုပ်ခြင်းဖော်ပြရလျှင် HPLC ကောလံကို ညစ်ပတ်စေခြင်းမှ ကာကွယ်ပေးပြီး NMN ကို < ၀.၁% အထိ စိစိမ့်စေနိုင်သည့် အဆင့်အထိ UV အခြေခံမှုန်ညှာ (baseline) ကို တည်ငြိမ်စေပါသည်။

 

### ၈.၂ ဆော့ဖ်ဂဲလ် ပြဿနာ

NMNH ကို တည်ငြိမ်မှုကို မြင့်တင်ရန်အတွက် လိပ်ဆော့စ်ဖော်မော်လေး (liposomal) သို့မဟုတ် အဆီအခြေပါ ဆော့ဖ်ဂဲလ် (softgel) ပုံစံများဖြင့် အသုံးများလာပါသည်။ သို့သော် အဆီသည် ထုံးစံအတိုင်း HPLC အတွက် အနှောင့်အယှက်ဖြစ်ပါသည်။ ဤထုတ်ကုန်များကို စမ်းသပ်ရန်အတွက် ကျွန်ုပ်တို့သည် "အရည်-အရည် အထုတ်ယူခြင်း" (LLE) နည်းလမ်းကို အသုံးပြုပါသည်။ ယင်းနည်းလမ်းတွင် ရေနှင့် ဟက်စ်စ်န် (Hexane) သို့မဟုတ် ကလိုရိုဖော်မ် (Chloroform) ကဲ့သို့သော အပိုလာ (non-polar) အရည်များကို ရောစပ်ပါသည်။ NMNH သည် ရေတွင် အလွန်ကောင်းစွာ ပေါက်ဝင်နိုင်သောကြောင့် ရေအလွှာတွင် ပါဝင်ပါသည်။ အဆီများနှင့် အဆီတွင် ပေါက်ဝင်နိုင်သော ဗီတာမင်များမှာ အောဂဲနစ် (organic) အလွှာတွင် ကျန်ရစ်ပါသည်။

**"အရင်အောက်ဆိုဒေးရှင်း" (Pre-Oxidation) အန္တရာယ် -** အထုတ်ယူခြင်းအဆင့်တွင် နမူနာကို အများအားဖြင့် အပူနှင့် မွှေနေမှု (agitation) တွင် ထုတ်ဖော်ပေးရပါသည်။ ပြင်ဆင်မှုအဆင့်တွင် ကာကွယ်ရေး အောက်ဆိုဒေးရှင်းနှင့် ကာကွယ်ရေးအောက်ဆိုဒေးရှင်း (antioxidant) ဖြစ်သော အက်စော့ဘီလ် ပေါလီမီတ် (Ascorbyl Palmitate) ကို မထည့်သွင်းပါက NMNH သည် စမ်းသပ်မှုအတွင်းတွင် NMN အဖြစ် အောက်ဆိုဒေးရှင်းဖြစ်သွားနိုင်ပါသည်။ ထိုသို့သော အဖြစ်အပျက်သည် NMN ညစ်ညမ်းမှုအတွက် "မမှန်ကန်သော အပြုသဘောဆောင်သော" (False Positive) ရလဒ်များကို ဖော်ပေးပါသည်။ Rainwood ၏ အတည်ပြုထားသော အထုတ်ယူခြင်း လုပ်ထုံး (RB-EXT-2026) ကို ဤအချက်ကို ဖယ်ရှားရန်အတွက် နိုက်ထရိုဂျင် (nitrogen) အုပ်ခုပ်မှုအောက်တွင် ဆောင်ရွက်ပါသည်။

 

၉။ စည်းမျဉ်းနှင့် သက်ဆိုင်ရာ အက်ဖ်ဖက်တ်များနှင့် စံသတ်မှတ်ချက် (Compendial Monograph) လိုအပ်ခြင်း

 

ယခုအခါတွင် NMNH ကို အမေရိကန် ဆေးဝါးစံသတ်မှတ်ချက် (USP) သို့မဟုတ် ဥရောပ ဆေးဝါးစံသတ်မှတ်ချက် (Ph. Eur.) တွင် စာရင်းသွင်းထားခြင်း မရှိသေးပါ။ ဤကုန်ကုန်စံသတ်မှတ်ချက် မရှိခြင်းသည် လက်မှုခွဲခြမ်းစိတ်ဖဲ့မှုများကို လုပ်ဆောင်ရန် လုပ်ငန်းခွဲများအတွက် "တရားဝင်" နည်းလမ်း မရှိကြောင်းကို ဖော်ပြပါသည်။ ဤစည်းမျဉ်းများ မရှိသော အခြေအနေတွင် မကောင်းမွန်သော လုပ်ငန်းခွဲများသည် အထူးသဖြင့် သန့်စင်မှုအများကြီး ပြသရန် အားသာချက်ရှိသည့် "အတွင်းသုံး" နည်းလမ်းများကို မကောင်းမွန်စွာ အသုံးပြုလေ့ရှိပါသည်။

 

Rainwood Biotech သည် NMNH အတွက် တရားဝင် စံသတ်မှတ်ချက်ကို ထောက်ပံ့ပေးရန် နိုင်ငံတကာ စံသတ်မှတ်ရေးအဖွဲ့များနှင့် အတိုင်းအတာများစွာ ပူးပေါင်းဆောင်ရွက်လျက်ရှိပါသည်။ ကျွန်ုပ်တို့၏ ရည်မှန်းချက်မှာ **340nm UV မှန်ကန်မှုစမ်းသပ်မှု** ကို "ပြန်လည်ပေးသော နီကိုတီနာမိုင်ဒ် မိုနိုနျကလီယိုတိုက်" ဟု အမည်ပေးထားသည့် ပစ္စည်းများအတွက် မဖြစ်မနေ လိုအပ်သည့် လုပ်ထုံးလုပ်နည်းအဖြစ် သတ်မှတ်ရန်ဖြစ်ပါသည်။ ထိုစံသတ်မှတ်ချက်ကို တရားဝင် သတ်မှတ်မှုမရှိမီအထိ သက်သေပြရန် တာဝန်သည် မှတ်ပုံတင်အမည်ပိုင်ရှင်များအပေါ်တွင် ကျရောက်ပါသည်။ ဤအမြင်မှ နည်းပညာဆိုင်ရာ လမ်းညွှန်ချက်များကို အသုံးပြုခြင်းသည် စည်းမျဉ်းစိုက်မှုဆိုင်ရာ စုံစမ်းစစ်ဆေးမှုများနှင့် စားသုံးသူများ၏ တရားရေးဆိုင်ရာ တောင်းဆိုမှုများမှ ကာကွယ်ရန် အကောင်းဆုံး ကာကွယ်မှုဖြစ်ပါသည်။

 

## ၁၀။ အနာဂတ်အမြင်- HPLC ကို ကျော်လွန်သည့် နည်းပညာများ

 

HPLC သည် လုပ်ငန်းလေးများတွင် အဓိကအားဖေးပေးနေသော နည်းပညာဖြစ်သော်လည်း ထိုနည်းပညာကို အထောက်အပံ့ပေးရန် အသစ်သော နည်းပညာများသည် အဆင့်ဆင့် ပေါ်ထွန်းလာနေပါသည်။

၁။ **လျှပ်စစ်ဓာတုခွဲခြမ်းစိတ်ခွဲသည့်နည်းဖြင့် အရေးကြီးသော အမှုန်အမှုန်များကို အတိအကျ ခွဲခြမ်းစိတ်ခွဲခြင်း (LC-MS) -** ဤနည်းလမ်းသည် အမှုန်အမှုန်၏ အတိအကျသော မော်လီကျူလာအလေးချိန်ကို ပေးစေသည်။ NMNH သည် m/z ၃၃၇.၀၈ ဖြစ်ပြီး NMN သည် ၃၃၅.၀၆ ဖြစ်သည်။ LC-MS သည် အမှုန်အမှုန်၏ အမည်အတည်ပြုခြင်းအတွက် "ရှေးရိုးစွဲ စံနှုန်း" ဖြစ်သော်လည်း ၎င်း၏ စုစုပေါင်းစရိတ်များခြင်းကြောင့် ပုံမှန်အမှုန်အမှုန်များကို စမ်းသပ်ရာတွင် အသုံးပါသည့် နည်းလမ်းများထဲတွင် လက်တွေ့ကျမှုနည်းပါသည်။

၂။ **နျူကလီယားသံလိုက်အာရုံခံမှု (NMR) -** ၁H-NMR သည် ဒိုင်ဟိုက်ဒရိုပိုင်ရီဒင်း စက်ဝိုင်းပေါ်ရှိ ပရိုတွန်များကို အတိအကျ ခွဲခြမ်းစိတ်နိုင်သည်။ ဤနည်းလမ်းသည် NMNH ၏ အသွင်အပြင်များကို ခွဲခြမ်းစိတ်ရာတွင် အတိအကျဆုံးဖြစ်ပါသည် (ဥပမါ - ၁,၄-လျှော့ချမှု နှင့် ၁,၆-လျှော့ချမှု အသွင်အပြင်များကို ခွဲခြမ်းစိတ်ခြင်း)။

၃။ **FT-IR စပက္ထရိုစကော့ပီ -** HPLC ထက် အာရုံခံမှုနည်းသော်လည်း ဖိုရီယာ-ထရိုင့် အင်ဖရာရက် စပက္ထရိုစကော့ပီ (FT-IR) သည် လျှော့ချထားသော စက်ဝိုင်း၏ N-H နှင့် C=C အလုံးအရေးကြီးသော အာရုံခံမှုများကို ခွဲခြမ်းစိတ်နိုင်ပါသည်။ ထို့ကြောင့် အသုံးပြုသည့် အမှုန်အမှုန်များကို အတိအကျ အမည်အတည်ပြုရာတွင် ဒုတိယအဆင့်အဖြစ် အသုံးပါသည်။

 

## ၁၁။ နိုင်ငံတကာစံနှုန်းအသစ်ကို သတ်မှတ်ခြင်း

 

NMNH ၏ "HPLC အမည်အကောင်အသက်" သည် နည်းပညာဆိုင်ရာအသေးစိတ်အချက်သီးသန့်သာမက စျေးကွက်အပေါ် ယုံကုံမှု၏ အခြေခံအုတ်မြစ်ဖြစ်ပြီး စားသုံးသူများ၏ လုံခြုံရေးကို ကာကွယ်ရာတွင် ပထမဆုံးအတန်းဖြစ်သည်။ NAD+ ကို ပိုမိုထိရောက်စေရန်နှင့် စျေးနှုန်းပိုမိုမြင့်မားစေရန် လုပ်ငန်းကွက်သည် ပိုမိုတိက်မာလာနေပါသည်။ 340nm ဖြင့် အတည်ပြုထားသော HPLC အစီရင်ခံစာများနှင့် UV-Vis စကင်များကို မပေးနိုင်သည့် (သို့) မပေးလိုသည့် ပေးသွင်းသူများသည် အများအားဖြင့် "မှောင်မှောင်ခေါင်ခေါင် ယုံကုံမှု" ကို တောင်းဆောင်နေခြင်းဖြစ်ပါသည်။ ထိုသို့သော ယုံကုံမှုသည် အရေးကြီးသော တရ်ရ်ရ်မှုများနှင့် သတိထားမှုရှိသော စားသုံးသူများရှိသည့် ခေတ်တွင် အာဟာရဖြည့်စွက်စာလုပ်ငန်းကွက်အတွက် အခွင့်အရေးမှုဖြစ်လာပါသည်။

 

Rainwood Biotech သည် အထောက်အထားအခြေပြု ဖွင့်ဟမှုကို အလေးထားပါသည်။ **340nm Identity Protocol** ကို စနစ်တကျ အသုံးပြုခြင်း၊ HILIC ကြောင်းကြောင်းခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုကို အသုံးပြုခြင်းနှင့် အက်စစ်-အယ်လ်ကာလီ အခြေအနေများ (neutral-pH mobile phases) ကို အမျှော်လင့်ထားခြင်းဖြင့် NMN အစားထိုးမှုနှင့် ပျက်စီးမှုများကြောင့် ဖောက်ဖဲ့သူများ ရင်ဆိုင်ရသည့် ငွေကြေးဆိုင်ရာနှင့် ဂုဏ်သိက္ခာဆိုင်ရာ အန္တရာယ်များကို ကာကွယ်ပေးပါသည်။ NMNH ၏ ကမ္ဘာတွင် သင်သည် 340nm တွင် မကြည့်လျှင် သမ္မာတရားကို မကြည့်ရသည်။ ကုန်ပစ္စည်းအမျိုးအစား NMNH ၏ ရှည်လျားသော အသက်ရှင်နေမှုနှင့် အတည်ပြုမှုကို သေချာစေရန် ကျွန်ုပ်တို့သည် စက်မှုလုပ်ငန်းနှင့် ပတ်သက်သည့် အားလုံးကို ဤကြီးမားသော စံနှုန်းများကို အသုံးပြုရန် ဖိတ်ခေါ်ပါသည်။

 

---

*Rainwood Biotech သည် ကျွန်ုပ်တို့၏ ကမ္ဘာလုံးဆိုင်ရာ ဖောက်ဖဲ့သူများအတွက် အပြည့်အဝသော အထောက်အထားအခြေပြု ပံ့ပိုးမှုများနှင့် တတိယပါတီ အတည်ပြုမှုဝန်ဆောင်မှုများကို ပေးဆောင်ပါသည်။ ကျွန်ုပ်တို့၏ အတည်ပြုထားသော NMNH HPLC နည်းလမ်း (RB-NMNH-2026-V1) ကို အသုံးပြုရန် သို့မဟုတ် သင့်ထောက်ပံ့ရေးကွန်ရက်အတွက် နည်းပညာဆိုင်ရာ စစ်ဆေးမှုကို စီစဥ်ရန်အတွက် ကျွန်ုပ်တို့၏ နည်းပညာဆိုင်ရာ ကုန်ပစ္စည်းစံနှုန်း ရုံးသို့ ဆက်သွယ်ပါ။*